临床医学论文-脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织的细胞凋亡.doc

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1、临床论文-脓毒症致急性肺损伤大鼠肺组织细胞凋亡作者:徐晓义鲍石卫忠【关键词】噬菌；败血症；肺损伤目的观察脓毒症急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织细胞凋亡情况。

2、方法SPF级SD大鼠24只，盲肠结扎穿孔(CLP)复制脓毒症模型。

分别于CLP后36和72h颈椎脱臼处死大鼠，收集肺组织。

3、肺组织he染色，观察病理变化，透射电镜和TUNEL法检测细胞凋亡。

4、结果HE染色显示CLP后72h肺泡间隔增宽，间质充血水肿，肺泡腔变窄，炎性细胞渗出。

5、TUNEL法显示CLP后36和72小时肺组织细胞凋亡指数(AI)增加，其中36小时AI最高(P透射电镜证实了细胞凋亡的特征性变化。

6、结论脓毒症大鼠肺组织AI明显升高，细胞凋亡可能在脓毒症ALI的发生发展中起重要作用。

7、【关键词】:嗜食；败血症；肺损伤摘要目的探讨脓毒症急性肺损伤(Ali)的肺意外。

8、方法24只S-D大鼠采用盲肠结扎穿孔法(CLP)复制脓毒症模型。

在CLP后36和72小时处死大鼠。

对肺进行苏木精和伊红染色。

凋亡通过TUNEL试验(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记)和电子显微镜测定。

结果CLP后72h，间质水肿，炎性细胞大量浸润，肺结构受损。

电子显微镜显示细胞凋亡的特征性结果。

TUNEL检测显示72h时阳性细胞明显多于0h时。

结论细胞凋亡可能在ALI的发生发展中起重要作用。

【关键词】凋亡；败血症；急性肺脓毒症(脓毒症，又称全身性感染)是危重患者死亡的主要原因之一，目前尚无有效的脓毒症治疗方法。

美国每年有75万人发生脓毒症，其中21万人死亡1，因此深入研究脓毒症的发病机制具有重要意义。

近年来，国内外研究发现，细胞凋亡在脓毒症的发生发展中起着重要作用。

淋巴细胞凋亡会导致免疫抑制，实质性器官凋亡会促进器官功能损害。

本研究旨在观察脓毒症ALI大鼠肺组织细胞凋亡及其在ALI发生发展中的作用。

材料与方法1实验动物24只健康成年雄性SPF级SD大鼠，体质量250300g，由浙江省医学科学院动物中心提供。

模型2的建立:腹腔注射3%硫喷妥钠麻醉，盲肠结扎穿孔(CLP)复制脓毒症模型。

参照Chaudry等2的方法，在腹部中线做2cm切口，在距盲肠盲端12cm处用1号线结扎盲肠。

在结扎的远端用18号穿刺针将盲肠穿刺两次。

为防止针孔闭合，18号穿刺针外套管经盲肠插入，外套管用1号线牢牢固定在肠壁上。

盲肠也并入腹腔并闭合。

3标本采集与处理CLP后0h、12h、36h、72h颈椎脱臼处死大鼠，立即取出肺。

4检测指标(HE染色形态学观察，光镜下观察肺组织病理变化；醋酸铀-柠檬酸铅双重染色，用TECNA10电镜观察细胞凋亡。

(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL法)肺组织用10%福尔马林固定624小时，然后切成4m厚的石蜡切片。

石蜡切片按照原位凋亡试剂盒(试剂盒购自罗氏公司，显色剂AP-red购自北京中山生物技术有限公司)提供的方法操作，光学显微镜下观察计数。

统计分析数据用均数标准差(s)表示，数据用SPSS0软件进行统计分析处理。

数据比较采用单因素方差分析(P结果1肺组织病理组织学观察显示，CLP后12h，肺泡间隔增宽，炎性细胞渗出，以中性粒细胞和淋巴细胞为主，肺泡腔变窄。

36和72小时，肺组织病理改变加重，肺泡隔明显充血增宽，大量炎性细胞渗出，肺泡腔明显变窄，有时可见肺实变。

2透射电镜TECNA10电镜显示CLP后72h凋亡细胞染色质浓缩，边缘聚集，细胞核固缩，细胞膜完整，有时可见凋亡小体，肺泡上皮细胞板层小体排空，大量空泡出现3TUNEL检测结果光学显微镜下，凋亡阳性细胞核呈红色染色。

从同一切片上随机取5个高倍视野(，计算平均阳性细胞的凋亡指数(AI)3可见CLP后36和72小时的AI高于0小时(P不同时间点肺组织的AI如表1所示。

凋亡细胞包括炎性细胞，如肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、血管内皮细胞和淋巴细胞。

表CLP后大鼠肺组织AI比较注:与各时间点0h比较:*P本研究采用CLP复制脓毒症模型，发现CLP后1272，大鼠肺组织出现肺泡间隔增宽、炎性细胞浸润、毛细血管扩张、出血、肺泡结构破坏等病理改变。

，且病变程度随时间而加重，说明ALI的模型复制成功。

本实验通过透射电镜发现CLP后1272小时肺组织出现细胞凋亡，TUNEL法显示1272小时时AI显著增加。

凋亡细胞包括炎性细胞，如支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞、血管内皮细胞和淋巴细胞。

脓毒症最重要的并发症(后续)是器官功能障碍，细胞凋亡在脓毒症ALI中的作用可能是:肺泡上皮细胞和血管内皮细胞凋亡导致血管壁和肺泡壁通透性和渗出性增加，导致肺泡扩散功能下降，大量淋巴细胞凋亡导致免疫功能紊乱，影响促炎和抗炎反应的平衡、共刺激分子的表达和细胞免疫功能下降6本实验还发现，CLP后1272，肺组织AI先升高后降低，可能是因为随着CLP时间的延长，部分细胞坏死，大量凋亡细胞被吞噬细胞清除，凋亡是一个动态的发展过程。

综上所述，脓毒症时肺组织大量细胞凋亡，调控细胞凋亡将有助于防治脓毒症时器官功能障碍。

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