临床医学论文-脑缺血与神经细胞凋亡.doc

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1、临床论文-脑缺血与神经细胞凋亡【关键词】凋亡(apoptosis，APO)脑缺血后又称程序性细胞死亡(programmedcelldeath，PCD)，是细胞受到生理或某些病理信号刺激后，通过激活其内部机制，主要是通过内源性核酸内切酶的激活而发生的细胞死亡过程。

2、它是基因控制下的主动“细胞自杀”，在各种组织器官发育的特定阶段、各种组织的生长调节和自身反应性免疫细胞的清除中起着重要作用13。

许多研究表明，缺血后脑损伤与神经细胞凋亡有关。

3、1脑缺血与神经元凋亡许多研究表明，弥漫性和局灶性脑缺血均可引起神经元凋亡，凋亡细胞的数量和位置与缺血的时间和程度以及神经元的敏感性有关4Macus5等人首先报道了大鼠脑缺血后半影区出现大量凋亡细胞。

4、楚兆虎6观察到大鼠局灶性脑缺血再灌注后TUNEL凋亡细胞位于细胞核内，再灌注后30min出现少量TUNEL凋亡细胞，位于纹状体水肿区周围。

6h，基底节水肿加重，边缘可见小梗死灶和凋亡细胞。

5、24h，基底节区梗死灶扩大，边缘可见大量凋亡细胞，皮质内也可见凋亡细胞。

72小时时，凋亡细胞位于基底节和皮质的梗死边缘。

Nitori7等人应用沙鼠前脑缺血5分钟的模型。

6、缺血后第3天，海马CA1区锥体细胞出现DNA片段，第4天，凝胶电泳出现DNA阶梯，电镜下可见核染色质聚集和凋亡小体。

7、Sei8利用沙土鼠前脑缺血10分钟的模型，定量分析发现，12小时海马CAI区可见DNA片段，48小时达高峰，5天后仍可检测到。

TUNEL显示DNA片段主要位于海马CA1区的神经元。

8、Volpe9在对大鼠弥漫性脑缺血的研究中发现，脑缺血后数小时纹状体内可检测到TUNEL标记的阳性神经元，但在第3天海马内可检测到。

凝胶电泳DNA梯和TUNEL标记的神经元具有相同的时程关系，提示短暂性前脑缺血后易损神经元的死亡伴随着核酸内切酶的激活，凋亡参与了海马迟发性神经元死亡的发生。

其他学者对大鼠弥漫性缺血的研究与上述结果基本一致10，11此外，脑缺血再灌注损伤后神经细胞的凋亡也离不开基因的参与。

因为细胞凋亡是细胞接受某种信号或受到某种因素刺激后，一些凋亡相关基因相互作用而导致的细胞自然死亡的主动过程。

一些基因如bcl、bax参与细胞凋亡的调控过程，bax/bcl的比值可以决定细胞是否凋亡:bax高表达引起凋亡，bcl高表达抑制凋亡。

缺血后一段时间，bcl表达下降，与细胞凋亡呈负相关612刘福东13等人实验观察到，大鼠局灶性脑缺血2小时，再灌注30分钟后，bcl-2蛋白阳性物质定位于胞质溶胶中，尤其是核周细胞。

再灌注6h阳性细胞分散于基底节和皮质，1d数量减少，仅局限于大脑皮质边缘，3d几乎无表达。

2缺血后脑细胞凋亡的可能机制缺血后脑细胞凋亡的机制尚不清楚。

研究表明，可能与缺血/再灌注后神经细胞生存环境的改变有关，包括兴奋性氨基酸、自由基、一氧化氮(no)、Ca2+等。

以及一些凋亡诱导基因的过度表达。

细胞内钙超载在缺血性神经元凋亡的发生中起着关键作用钙超载及其引发的一系列有害代谢是导致神经细胞死亡的“最后共同通路”。

它激活一些钙依赖蛋白酶参与神经元凋亡14兴奋性氨基酸、氧自由基谷氨酸等氨基酸和自由基的毒性作用在再灌注损伤和迟发性神经元死亡中起重要作用15一方面，谷氨酸受体介导的兴奋性毒性可以通过凋亡机制实现；另一方面，自由基也在神经元凋亡中发挥重要作用16在脑缺血、缺氧和再灌注条件下，神经元产生大量自由基和活性氧，遭受过氧化损伤，导致线粒体质膜脂质过氧化，蛋白质硝化，线粒体膜结构和电子链酶复合物受损，同时线粒体损伤，氧化磷酸化减弱或不能，ATP生成迅速减少，质膜钙泵失效，线粒体内钙离子大量积累，引发线粒体进一步损伤，诱导神经元凋亡。

此外，氧和葡萄糖供应减少引起的能量下降也可直接诱导细胞凋亡17另外，细胞凋亡是细胞接受外界信号后发生的主动自杀过程，因此需要新的基因表达。

目前，研究表明许多基因如bcl-Pcmyc等。

与细胞凋亡密切相关。

Bcl-2是抑制凋亡的重要基因之一，其过表达可抑制神经细胞的凋亡18，19正常P53基因(野生型)可促进细胞凋亡，而突变型P53基因(突变型)可抑制细胞凋亡20，21Cmyc能促进细胞增殖，诱导细胞凋亡。

这种相反的作用依赖于生长因子的存在与否，生长因子可以抑制凋亡，促进增殖。

否则，它会促进细胞凋亡22因此，脑缺血后细胞间液兴奋性氨基酸浓度升高、氧自由基产生、一氧化氮(no)过量产生、细胞内Ca2+超载和控制凋亡基因表达异常是细胞凋亡的可能机制。

中药对缺血后脑细胞凋亡的影响中药对缺血性中风有较好的疗效。

近年来广泛研究的黄芪、川芎和中药复方均具有神经细胞保护作用，影响缺血后脑细胞凋亡。

李平23通过结扎大鼠双侧颈内动脉复制脑缺血模型，用免疫组化和流式细胞仪分别检测bcl-P53免疫反应细胞和凋亡细胞。

结果表明，双侧颈内动脉结扎后，局部脑血流量减少，大脑皮质促凋亡基因表达显著增加。

腹腔注射黄芪可抑制P53的表达，增强bcl-2的表达。

越早应用，效果越明显，提示黄芪可抑制缺血区促凋亡基因的表达，增强抗凋亡基因的表达。

卢等24在实验大鼠缺血前应用川芎嗪干预，然后用免疫组织化学方法检测脑缺血再灌注不同时间段凋亡相关基因c-fos和bcl-2蛋白的表达变化。

结果表明，川芎嗪组大鼠脑缺血后梗死体积明显缩小，脑缺血再灌注时皮质和基底节c-fos表达明显减少，bcl-2表达明显增加，表明川芎嗪能抑制脑缺血再灌注时细胞凋亡的发生。

另一方面，张伯胜25研究了桂枝、茯苓、泽泻、牡丹皮、桃花、赤芍、川芎等药物对脑缺血模型细胞凋亡的影响，用大鼠夹闭双侧颈内动脉，造成脑缺血60min的动物模型。

免疫组织化学法检测bcl-2基因的表达。

结果表明，中药复方能明显增强脑缺血后大脑皮质bcl-2的表达。

提示该中药复方能抑制实验性脑缺血的细胞凋亡过程。

作者应加强单味或复方中药的研究，为缺血性脑血管病的治疗提供新的有效途径。

前瞻性研究表明，凋亡是缺血性损伤后脑细胞死亡的重要方式之一，尤其是易损区迟发性神经元损伤的机制很可能是凋亡。

实验表明，凋亡和坏死是两种类型的细胞死亡，它们对治疗的反应完全不同。

使用抗凋亡药物或相应对策可以保护神经细胞免受损伤，为缺血性脑损伤的治疗开辟了新的途径。

因此，大力开发缺血性损伤后抗凋亡药物是今后的研究方向之一。

中医药抗缺血性损伤后神经细胞凋亡的研究刚刚起步。

就目前的资料来看，已有中药单体及其有效成分的研究，但还没有根据中药理论进行中药复方的研究报道。

加强中医药对缺血性损伤所致神经元凋亡的研究具有重要意义。

缺血再灌注脑损伤所致神经细胞凋亡模型的制备方法已有很多报道，建立统一规范的动物模型是研究的关键。

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