临床医学论文-脑型肌酸激酶同工酶测定在非心源性疾病的应用.doc

临床论文-脑肌酸激酶同功酶在非心源性疾病中的应用[摘要]目的探讨脑肌酸激酶同功酶(CK BB)在肿瘤和自身免疫性疾病筛查及器官损害定位中的意义。 方法采用免疫抑制法检测血清中心肌肌酸激酶同功酶(CK MB)和肌酸激酶(CK)的活性，并计算其比值。 随机抽取90份CKMB/CK > 50%的非心源性疾病血清标本和30份对照血清，用CK同工酶琼脂糖凝胶电泳进行分离鉴定。 结果假性增高的血清CK MB多见于肿瘤和自身免疫性疾病。经电泳分离和可见光扫描，肿瘤和自身免疫性疾病组CK BB含量明显高于对照组，差异有统计学意义(P 结论血清CK BB的检测对肿瘤和自身免疫性疾病的辅助诊断及器官损伤的定位具有重要意义。 【关键词】血清肌酸激酶(CK)及其脑肌酸激酶同工酶的检测是诊断急性心肌梗死(AMI)最有价值的生化指标之一[12]。然而，由于方法学的不完善和其他因素可引起脑肌酸激酶同功酶(CK-BB)升高，临床上常出现CK-MB活性假升高的现象。甚至可能出现CK MB活性高于或等于总CK活性的情况，这类患者多为非心脏疾病，如恶性肿瘤、脑出血、自身免疫性疾病、一氧化碳中毒等富含CKBB的组织器官损伤等。因此，进一步检测这些患者血清中CKBB的含量具有重要意义。 作者用免疫抑制剂法测定血清CKMB，筛选CKMB/CK > 50%的样本，进一步用CK同功酶琼脂糖凝胶电泳分离鉴定，可见光扫描定量分析。该报告如下 1目的与方法1.1目的从2005年3月至5月住院患者的4 000份血清标本中，通过免疫抑制试验筛选出ckmb/CK > 50%的血清标本90份(其中肿瘤组51份，自身免疫性疾病组28份，其他疾病组11份)，经心电图和彩色多普勒超声检查排除严重心脏病。 其中男性51例，女性39例，年龄(4，815)岁(6~80岁)。 30例对照血清样本，均为非孕妇人群，年龄(45.11)岁(20~76岁)。 肿瘤组、自身免疫性疾病组、其他疾病组和对照组在年龄和性别上无显著差异。 1.2仪器及试剂自动生化分析仪(AU 2700，Olympus，Japan)，SPIFE2000电泳仪，EDC自动扫描仪(GE，USA) CK kit(中生北控生物科技公司)；CK MB试剂盒(北京久强生物技术有限公司)；Spick同功酶试剂盒(美国海伦娜公司)，包括SPIFE CK同功酶凝胶片(10片)、SPIFE CK同功酶试剂(201.5 ml)、SPIFE CK同功酶稀释液(20.2 mL)、REP滤纸C(10片)、柠檬酸脱色剂(1包) 1.3方法1.3.1用全自动生化分析仪检测总CK和CKMB的活性，记录CK和CKMB的测定值。 1.3.2CK同工酶琼脂糖凝胶电泳加样:将1μL SPIFE CK激活剂加入100 μL样品中，混合，室温放置10 min，将17 μL预处理样品加入样品槽中。 电泳:在浸有AMP/MOPSO缓冲液的琼脂糖凝胶上，在13℃和750 V电压下电泳4.5分钟。 加入酶试剂:将1瓶CK同工酶试剂用同工酶稀释液1.5 mL复溶，倒置混匀，加入底物150 μL，倒在凝胶片的阳极侧，将试剂均匀涂于凝胶片表面。 孵育:45℃孵育20分钟。 脱色干燥:用0.3%柠檬酸脱色剂脱色5 min，63℃干燥30 min。 EDC可以用可见光定位和扫描，记录CK BB和CK MB的值以及一些异常谱带。 1.3.3CK同工酶琼脂糖凝胶电泳试剂可靠性验证试验CK同工酶电泳试剂与CK MB试剂(中生公司、久强公司)的可比性分析 按照1/2 CMB %(电泳)+ckbb%(电泳)≈1/2 CMB/CK(免疫抑制)对120份样本进行验证，CK同工酶电泳测得的B亚基百分比与免疫抑制大致相当。 1.4统计处理计数资料用xs表示，采用t检验。 结果2.1CK同工酶的CK电泳图1为肿瘤患者与对照组血清CK同工酶的比较。 2.2EDC可见光扫描图像显示，肿瘤患者血清中CK BB成分明显增加(图2) 2.3免疫抑制剂法检测CKMB/CK > 50%的90份样本中，肿瘤组51份占56.7%，自身免疫性疾病组28份占31.1%，其他疾病组11份占12.2%。 CK同工酶经电泳分离后，CK BB的结果见表1。 表1每个疾病组的CKBB水平2.490个样本，43个样本的CKBB含量> 60%， 免疫抑制法测定CK MB活性的原理探讨抗CKM抗体能抑制M亚单位的活性，测定B亚单位的活性。CK BB在正常血清中的含量很少[3]，用一般方法检测不出来，所以CKMB的活性可以用结果乘以2来粗略表示。 显然，所有能增加CK BB的疾病都能影响CK MB的测定，这就使它成为假的。 由于采用了免疫抑制法，CKMB/CK患者血清CK总活性> 50%者均 因此，在CK总活性不高，而用免疫抑制剂法CKMB明显增高时，有必要进行CK同工酶分析，以确定CKMB是否为假性增高，排除非心肌来源的可能。 鉴于CK及其同工酶在人体内的组织分布存在显著差异，其相应器官的损伤将直接影响血清CK活性和CKBB含量的测定。根据CK的总酶活性和CKBB的电泳百分比，可以大致估计出最有可能受损的器官，有助于判断肿瘤、自身免疫性疾病等非心源性疾病所涉及的器官。 由于肿瘤细胞可以出现返祖现象，胚胎同工酶(CKBB)的出现使得肿瘤患者血清CKBB水平明显升高[4] Hirata等对胃癌患者术前24小时的CK同工酶进行了测定，发现几乎所有患者血清中均有CKBB[5] 王等报道广泛期小细胞肺癌患者血清中可检测到BB同工酶[6] 研究表明，肺癌患者血清CK BB活性与疾病严重程度呈正相关，尤其是在有远处转移的患者中[7] Silverman等人报道前列腺癌患者血清中CK BB的阳性率为75%~89%，早于组织学和血清ACP的变化[8] 本实验中，免疫抑制法测得的CKMB/CK > 50%的90例样本中，肿瘤疾病占68.9%，自身免疫性疾病占13.3%。经CK同工酶电泳进一步分离后，30份对照血清中CKBB水平有不同程度的升高，而CKBB含量无升高。 由于所选标本中的患者年龄均大于6岁，排除了胚胎期肝脏中CKBB合成增多的影响，表明肿瘤患者血清中检出CKBB的概率远高于正常人，差异有统计学意义(P 因此，当用免疫抑制法测得CKMB/CK > 50%且CK酶活性不高时，应采用CK同工酶电泳进一步分离鉴定。 如果电泳显示CK-BB带百分比增加，在排除心源性疾病后应警惕恶性肿瘤的可能[9] 此外，本研究发现有1例患者首次诊断为乙肝引起的肝硬化，其血清CK活性(酶法)和CKMB活性(免疫抑制法)分别为87 IU/L和57 U/L。同工酶电泳显示CKMB含量为7.8%，CKBB含量高达28.6%，经检测甲胎蛋白(AFP)和CT确诊为肝癌，故血清CKBB的测定可作为肿瘤疾病之一。 鉴于临床上一些早期肿瘤和自身免疫性疾病的靶器官难以确定，给患者的诊断和治疗带来了很多麻烦，因此通过测定血清中的某些特定酶来诊断某些特定的疾病或特定组织器官的病变就显得极为重要。 由于人体主要组织器官中CK和CKBB的含量存在显著差异，而且在CK同工酶电泳中CKBB含量丰富的器官血清中CKBB的百分比明显高于CKBB含量低的器官，所以差异显著。 本研究发现，血清CK的对数与CK BB的百分比之间存在一定的趋势关系，这可能有助于肿瘤和自身免疫性疾病的器官定位，对患者的早期诊断和治疗具有一定的应用前景。 【参考文献】[1]潘伯仲。美国临床生物化学对心肌标志物在冠心病中应用的建议。上海医学检验杂志，2000，15(1):5。[2]黄忠尧，，赵。缺血再灌注后心肌诱导型一氧化氮合酶基因表达和活性的变化40(3):207-210。[3]阿南德·CK同工酶在电泳中的变异[J].实验室医学，1989年，6(5):305。[4]Zarghami N，He Y，Diamands E P，等.用超灵敏时间分辨免疫荧光技术定量测定肿瘤细胞和血清中肌酸激酶BB同工酶[J].临床生物化学，1995，28(3):243-253。[5]Nagdyman N，Komen W，Ko H K，等.新生儿窒息后缺氧缺血性脑病的早期生化指标[J].儿科研究，2001，49:502-506。[6]王，，陆建宇，丁彦明. 1例小细胞肺癌患者血清MB和BB同工酶升高[J].中华医学杂志(台北)，1999年，5: 270273。周，，王红，等.新生儿缺氧缺血性脑病肌酸激酶同功酶和胱抑素C的变化及临床意义.应用临床儿科杂志，2006，11 (12): 753758。 [8] 2001: 135140.马琦，李，，等.血清MB/大于30%的病因分析[J].临床检验杂志，2003，18 (3): 167181。