临床医学论文-脑脊液中高浓度铁对大鼠行为学及神经元凋亡的影响.doc

1、 临床论文脑脊液高浓度铁对大鼠行为和神经元凋亡的影响摘要目的:研究高浓度铁对大鼠行为和神经元凋亡的影响，以进一步探讨其与阿尔茨海默病(AD)病因学的关系。 方法:实验组大鼠侧脑室埋管注入FeCl 3 10 l，经脑室给药。对照组注入10 L人工脑脊液，第5、10天重复1次。Morris水迷宫检测大鼠行为学变化，流式细胞仪检测膜联蛋白V-FITC染色细胞早期神经元凋亡百分率。 结果:行为实验组大鼠的时间、距离和搜索平台均比对照组长。实验组染色阳性细胞百分比高于对照组。 结论:本实验证明脑室内注射铁离子可引起学习记忆障碍大鼠的行为改变和神经元凋亡，这是AD的特征性临床病理改变，因此推测脑脊液中铁离

2、子的高浓度可能与散发性AD的病因有关。 【关键词】Morris水迷宫铁离子凋亡阿尔茨海默病摘要目的:探讨高关注比铁诱导的行为表现和分子病理改变。通过将塑料空心管嵌入大鼠的脑室，将FeCl3注射到大鼠的脑内。方法:15只大鼠分为对照组和实验组。实验组和对照组的老鼠。用牙钻在牙槽的左/右侧钻一个小钻孔。一根塑料空心管被植入脑室。手术后，将三氯化铁注入脑室。对照tats间隔5天进行3次注射。用Morris水迷宫检测行为学表现，流式细胞仪检测负载膜联蛋白FITC细胞的早期凋亡率。结果:实验组和对照组大鼠的平均逃避潜伏期:逃避距离之和有显著性差异。铁处理动物的膜联蛋白FITC负载细胞凋亡率高于正常动物。

3、结论:腹腔注射高浓度铁可引起学习记忆损害和神经元凋亡，这是AD的临床和病理特征。关键词铁；AD；莫里斯水迷宫；凋亡阿尔茨海默病(AD)是一种临床上以进行性精神发育迟滞为特征，病理上以皮质和海马出现老年斑和神经原纤维缠结为特征的疾病。 近年来，随着家族性AD病因学的揭示，对散发性AD病因学的研究越来越受到重视。已发现环境和代谢在散发性AD的发生中起重要作用。 膳食(水)因素，特别是一些微量元素与AD病因的关系日益受到关注。 本研究将三氯化铁注入大鼠侧脑室，用Morris水迷宫检测其行为变化。为研究大鼠行为学变化和神经细胞凋亡的发生，进一步探讨铁离子与AD病因学的关系，采用膜联蛋白V-FITC染色

4、细胞，用流式细胞仪测定大鼠脑内早期凋亡细胞的百分比。 材料与方法1.1一般资料实验对象为18只3月龄雄性SD大鼠，起始体重250280 g，由山西医科大学动物中心提供。 随机分为实验组10只和对照组8只。 实验期间，他自由吃喝，关在笼子里。 1.2行为测量装置行为测量装置由Morris水迷宫和自动图像监控系统组成。 莫里斯水迷宫是一个圆形水池，直径120厘米，高50厘米，水深30厘米，水温23 水池池壁标有东、南、西、北四个进水点，水池分为西南、东南、东北(平台所在)、西北(记录时分别用1 4表示)四个象限。 在离池壁20 cm的象限3中心固定一个直径10 cm的圆形透明逃生平台，池水没过平台

5、1 cm。 测量前，用染发剂将鼠头染成黑色，在水池中加入奶粉，使水变白不透明。 图像监控系统同步记录大鼠的运动轨迹。 1.3动物筛选:将大鼠从面向池壁的象限1、象限2、象限4依次放入池中，在180秒内找到逃生平台，在平台上停留2秒，即视为逃生成功。 18只大鼠每天早晚各做一次行为测试，共5天10次。八次(含八次)躲过成功考生，其余排除。 1.4用戊巴比妥钠(40 mg/kg)包埋的脑室管腹腔注射麻醉，然后将小鼠头部固定在立体定向仪上。参照大鼠1立体定向寰椎旁正中切口，在中线旁做2 mm切口，用牙钻钻至前囟门横缝后硬膜下1.31.8 mm处3.5 mm处。拔出钻头后，垂直插入一根长0.9厘米、直

6、径1毫米的空心塑料管。 1.5给药方法:实验组取FeCl3溶液(5.2g/L)10 L，对照组取生理盐水10L，用微量取样器通过脑室埋管缓慢注入大鼠侧脑室。 每5天服用一次，共3次。 1.6水迷宫行为测试实验组9只，对照组6只。测试持续7天，平均潜伏期为秒。行程(厘米) 1.7用流式细胞仪计数大鼠大脑额叶皮质组织，用70%冷乙醇固定，机械制成单分散细胞悬液，低速离心(700r/min)，用500目筛弃去，调整细胞浓度至3106/ cell /mL，加入特异性早期凋亡细胞标记物Annexin V-FITC对标记细胞染色15 min，收集10000个神经元细胞。 1.8统计学方法数据用SPSS软件

7、包进行方差分析，用S表示，平均潜伏期和平均距离换算成lgX，早期凋亡百分率换算成SIN-1x，P 0.05时有显著性差异。 2实验组和对照组之间的平均潜伏期、距离和早期凋亡细胞的百分比显著不同(见表1)。 表1两组间早期凋亡细胞的平均潜伏距离、时间和百分比的比较3讨论纵观最近的研究，一般认为早发性AD与遗传因素有关，而晚发性AD与环境因素有关。有报道AD涉及铁代谢，脑内铁离子、转铁蛋白、转铁蛋白受体的变化与AD有直接或间接的关系1。Connor用免疫组织化学检测AD患者脑组织中铁、铁蛋白、转铁蛋白的含量2，发现老年斑和血管周染色呈强阳性，这些部位的铁蛋白染色阳性细胞也明显增多。另有研究证明AD

8、患者血浆和脑脊液中铁结合蛋白P97升高3，并提出将P97的浓度作为AD的检测指标。 由于AD是一种以智力低下为特征的疾病，研究人员常以Morris水迷宫作为检测AD动物模型的重要手段之一。 本研究结果表明，实验组大鼠在水迷宫行为测定中的平均逃避时间和行走距离延长，表明脑脊液注射铁离子可损害大鼠的行为，引起大鼠学习记忆功能障碍，这是AD的重要临床特征。 细胞凋亡在AD发病机制中的作用备受关注。原位标记技术可以证实AD患者脑内细胞凋亡的发生。年龄匹配的非AD患者脑内凋亡细胞数量明显增多，凋亡已成为AD神经元死亡的重要方式。 膜联蛋白V FITC是早期凋亡的特异性标志4，可以识别早期凋亡细胞。目前已

9、有文献报道将该方法作为细胞凋亡诊断的指标5 本研究用这种方法标记大鼠额叶细胞，观察到实验组早期凋亡的百分比明显高于对照组，说明实验组大鼠存在神经元凋亡。鉴于行为障碍和神经元凋亡是AD的临床和病理变化特征，推测脑脊液高铁与散发性AD之间存在相关性。 1markes bery W . r .阿尔茨海默病中的氧化应激低假设j.自由基生物医学，1997，23: 134147。2杜宇。铁，转铁蛋白和脑转铁蛋白受体j.生理科学进展，1999，30(4):337-340。3Kennard M L，Feldman H，Yamada T，等.铁结合蛋白的血清水平.p97在阿尔茨海默病中升高J。国家医学杂志1996年，2:1230-1235。4Boersma A W M，Nooter K，Qostrum R G，等.荧光异硫氰酸盐标记Annexin V定量检测顺铂诱导的中国仓鼠卵巢细胞凋亡J.细胞术1996，24:123。