临床医学论文-脆性组氨酸三联体基因及p53基因在肺癌组织中的表达及意义.doc

1、 临床论文-脆性组氨酸三联体基因和p53基因在肺癌中的表达及意义摘要目的探讨脆性组氨酸三联体基因(FHIT)在肺癌中的表达及其与肺癌分化程度、组织学分类和p53表达的关系。 方法应用组织芯片和免疫组化技术，分别检测110例肺癌和25例良性病变中FHIT和p53蛋白的表达。 结果that在良性肺组织中的异常表达率为16%，在肺癌组织中的异常表达率为85.5%。 肺癌与良性肺组织之间有显著差异(P p53异常表达和FHIT异常表达的共检出率为93.6% 结论FHIT蛋白可能成为肺癌早期诊断更有效的分子标志物，联合检测p53蛋白和FHIT蛋白有助于提高肺癌的检出率。FHIT蛋白影响肺部肿瘤细胞的分化

2、方向，为临床药物开发提供新思路。 【关键词】肺癌；脆性组氨酸三联体基因(FHIT)；摘要:目的探讨FHIT基因在肺癌中的表达及其与分化程度、组织学类型和p53基因表达的关系。方法应用免疫组织化学和组织芯片技术检测110例肺癌和25例肺良性病变标本中FHIT和p53的表达。结果肺良性病变中FHIT异常表达率为16%，肺癌中异常表达率为85.5%，两者差异非常显著(P 因此，探索FHIT基因与肺癌的关系可能会为肺癌发病机制的研究找到突破口。 本研究采用免疫组化技术和组织芯片技术检测110例肺癌和25例良性病变中FHIT和p53的表达，探讨FHIT与肺癌发生、发展和生物学行为的关系。 材料与方法1.

3、1材料110例肺癌和25例良性肺组织来自北京友谊医院。 所有肺癌患者术前均未接受化疗和放疗。有经验的病理医师根据WHO肺和胸膜组织学分类1999年第3版标准复查病理切片，其中鳞状细胞癌40例，腺癌58例，其他癌12例。其中高分化癌53例，中分化癌31例，低分化癌26例。 所有组织用10%福尔马林固定，石蜡包埋。北京友谊医院病理科构建了52、60、26三种组织芯片。每组芯片均采用正常肾组织作为定位标记，芯片直径6mm，芯片厚度4m(略)。 1.2主要试剂和方法兔抗人FHIT多克隆抗体购自中山生物技术有限公司和美国ZYMED公司。鼠抗人p53单克隆抗体和SP试剂盒购自福州迈信生物技术发展公司，均为

4、美国NEOMARKERS公司产品。 手术是根据成套工具的说明进行的。 用磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照，高压修复用于抗原修复。 1.3结果表明，FHIT蛋白在正常肺组织中主要表达于支气管上皮细胞、型肺泡上皮细胞和部分肺癌细胞的胞浆和胞核中。 此外，上皮组织周围的一些细胞，如淋巴细胞和组织细胞，可在细胞核和细胞质中呈阳性表达，呈棕黄色颗粒，如图1所示。 FHIT蛋白的阳性强度和阳性率按沈浩等1的方法观察 先根据染色强度评分:无色为0，淡黄色为1，棕褐色为2，棕褐色为3；然后按阳性细胞百分比计分:阳性细胞75%为4分；染色强度与阳性细胞百分比的乘积得到一个评分范围:0 12。 9 12为强阳性(

5、+)，5 8为阳性(+)，0 4为弱阳性(+/-)，不表示(-) 定义肺癌组织中FHIT蛋白免疫组化染色强阳性为正常表达，其余视为FHIT基因表达降低或缺失，即异常表达。 P53蛋白位于细胞核内，呈弥散或散在的粗细不等的棕黄色颗粒，如图2所示。 根据Kim等人2的方法，未染色或表达细胞百分比 30%为阴性，表达细胞百分比30%为阳性。 p53在肺癌中的阴性表达是正常的，而阳性表达是异常的。 1.4统计处理所有数据均采用SPSS 11.5统计软件包进行处理，采用RC行乘法表2检验和计数数据的相关分析，判断标准为P 0.052.2肺癌中FHIT基因与p53基因表达的关系2.2.1阴性表达组与p53

6、阳性表达组FHIT基因表达无显著差异(P0.05)，见表4。 表4肺癌中FHIT和p53表达的相关性p53病例数(略)注: 2 = 1.765，P 0.052 . 2 . 2 p53异常表达与FHIT异常表达有显著性差异(P 研究表明，FHIT异常发生在与外部环境相关的组织中，如胃、结肠、子宫颈和肺3 FHIT基因在染色体上占据约1Mb的位置，cDNA全长1095bp，由10个外显子组成，编码长度为500bp 4 关于肺癌组织中FHIT基因变异的研究很多。 Sozzi等5报道，约80%的小细胞肺癌和40%的非小细胞肺癌存在FHIT转录异常，90%的肺癌存在杂合性缺失(LOH)。 本研究用免疫组

7、织化学方法检测了110例肺癌标本和25例良性肺组织。发现肺癌组织和良性肺组织中FHIT基因表达有显著差异(P 本研究结果提示FHIT基因在正常组织中高表达，在肿瘤组织中低表达，提示FHIT基因可能参与了肺癌的形成。 目前，关于FHIT基因表达与肺癌组织分化程度关系的报道不一致。 结果表明，FHIT在不同分化程度肺癌中的表达有显著差异(P 因此，如果临床药物研究能够开发出FHIT蛋白并将其导入肿瘤组织，可能会促进肿瘤表型的逆转，从而达到治愈肿瘤的目的。 Tomizawa等人6表明，在不同组织类型的肺癌中，FHIT蛋白减少的百分比是不同的。 本研究表明，FHIT基因在不同组织学类型肺癌中的表达无显

8、著差异(P 0.05)，这与Tomizawa的研究不一致。 因此，FHIT基因表达与肺癌组织学分类的关系有待进一步研究。 p53基因的突变及其在人类肿瘤中的抗肿瘤作用已被深入研究，突变型p53蛋白易于通过免疫组织化学检测。 因此，突变型p53蛋白的检测已成为临床肿瘤诊断的重要标志。 本研究发现肺癌组织中FHIT的异常表达率明显高于p53的异常表达率(P 然而，p53蛋白阴性表达组和p53蛋白阳性表达组的FHIT表达差异无统计学意义(P 0.05) 因此，该研究提示肺癌组织中FHIT蛋白缺失与p53蛋白异常无相关性，FHIT是独立的表达指标，FHIT失活可能是独立于p53的生物通道，与研究一致。

9、同时，本研究发现p53和FHIT的异常表达率分别为53.6%和85.4%，表明FHIT异常表达比p53异常表达更为普遍。 因此，在肺癌诊断中，FHIT蛋白可能是比p53蛋白更有效的分子标志物。 此外，p53异常表达和FHIT异常表达的共检出率为93.6%，表明结合基因表达蛋白检测可以提高肿瘤的检出率。 综上所述，本研究结果表明，肺癌中FHIT蛋白表达减少或缺失，且与肺癌组织的分化程度密切相关，而FHIT表达与p53表达无关。 提示FHIT蛋白可能是一种重要的肿瘤抑制蛋白，在肺癌的发生发展中起重要作用。 FHIT蛋白易于免疫组化检测，有可能成为继p53蛋白后一种新的、更有效的肺癌临床诊断标志物。

10、 (此图见164页)参考文献 1郝晓萍，Willis J E，pretlow TG，等.结直肠癌和癌前病变中脆性组氨酸三联体表达的缺失J.癌症研究，2000，60(1):18-21。2金YW，李S，朴JH，等.结肠癌p53蛋白表达的免疫组化研究J.韩国医学杂志，1995，10(3):176-182。3金俊生，金宏，希姆YM，等.慢性吸烟者早期肺鳞状细胞癌中FHIT基因的异常甲基化J.致癌作用，2004，25(11):2165-2171。4Ohta M，Inoue H，Cotticelli MG，等.跨越染色体3p14.2脆性位点的FHIT基因与肾癌相关t(3；8)断点，在消化道癌症中是异常的J。细胞，1996，84(4):587-597。5索齐，威罗尼，内格里尼，等. FHIT基因3p14.2在肺癌中的异常表达J.细胞，1996，85(1):17-26。等. Fhit蛋白在期非小细胞肺癌中的表达及其临床病理意义J.癌症研究，1998，58(23):5478-5483。7李，吴春婷，施，等.台湾非小细胞肺癌鳞状细胞癌亚型中与p53过度表达相关的FHIT位点频繁等位基因缺失J.英国癌症杂志，2004，90(12):2378-2383。