临床医学论文-胰岛素样生长因子1对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤细胞凋亡的影响.doc

1、临床论文胰岛素样生长因子1对重症急性胰腺炎大鼠肺损伤细胞凋亡的影响【摘要】目的:探讨凋亡与bax的关系、bcl-2基因表达在重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤发病中的作用以及胰岛素样生长因子1 (IGF1)对SAP肺损伤细胞凋亡的影响。方法:将72只Wistar大鼠随机分为对照组、SAP组和IGF1组，每组24只。采用胆胰管内注射50 g/L牛磺胆酸钠的方法，于造模后6、12、24h建立大鼠SAP模型。光镜和电镜下观察肺组织病理变化，原位细胞凋亡检测法检测肺组织细胞凋亡，RT-PCR法检测肺组织bax mRNA和Bcl2 mRNA的表达。结果:SAP组血清淀粉酶、肺损伤病理评分、细胞凋亡指数、ba

2、x mRNA和Bcl2 mRNA表达均高于对照组，透射电镜下肺组织细胞凋亡明显增加。根据IGF-1预后判断，透射电镜下血清淀粉酶、肺组织细胞凋亡指数和肺损伤病理评分下降，bax mRNA表达下降，bcl-2 mRNA表达增加，肺组织细胞凋亡明显减少。结论:肺组织细胞凋亡和bax、bcl-2基因表达参与了SAP肺损伤的发病过程，IGF 1可通过抑制肺组织细胞凋亡减轻肺损伤，这可能部分是通过调节凋亡相关基因Bax、bcl-2的表达实现的。胰腺炎；肺/损伤；凋亡；胰岛素样生长因子1摘要目的:探讨肺组织细胞凋亡和bax、bcl 2表达在肺灌注诱导机制中的作用。重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺组织细胞凋亡

3、及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为3组:对照组(n=24)、SAP组(n=24)和IGF 1组(n=24)。每组随机分为3个时间单位(6、12、24 h)，每个时间单位8只。采用胆胰管逆行注射50 g/ L牛磺胆酸钠溶液建立大鼠SAP模型。分别于造模后6、12、24 h测定血清淀粉酶、肺损伤组织学评分。取肺组织进行光镜和透射电镜观察。TUNEL法检测肺组织细胞凋亡，RT-PCR法检测bax mRNA和bcl-2 mRNA的表达。结果:SAP组血清淀粉酶、肺损伤组织学评分、细胞凋亡指数、bax mRNA和bcl-2 mRNA的表达明显增加。透射电镜下凋亡

4、细胞明显增多。与同期SAP组相比，IGF-1组血清淀粉酶、肺损伤组织学评分、细胞凋亡指数、bax mRNA表达显著降低，而bcl-2 mRNA表达显著升高。透射电镜观察凋亡细胞明显减少。CONC结论:肺组织细胞凋亡和bax、bcl-2的表达可能参与了SAP肺损伤的发病机制。IGF-1均可通过抑制肺组织细胞凋亡来减轻肺损伤，其中调节bax和bcl-2的表达可能是其重要作用之一。【关键词】重疾；胰腺炎；肺部/损伤；凋亡；重症急性胰腺炎(SAP)是一种危重症，死亡率高达20% 30% 1。大多数1周内的死亡是由肺损伤引起的。目前，SAP肺损伤的发病机制仍不完全清楚。胰岛素样生长因子1 (IGF1)是

5、一种单链多肽，在调节机体生长发育中起重要作用。近年来，由于发现它在细胞凋亡的调节中起着重要作用而备受关注。探讨SAP肺损伤大鼠模型中细胞凋亡和bax的变化。bcl-2基因表达在重症急性胰腺炎肺损伤中的作用及IGF-1对预后的影响。1材料与方法1.1材料成年Wistar大鼠72只(清洁级)，体重(20050) g，雌雄不限(兰州大学动物实验中心)；牛磺胆酸钠(适马公司)；胰岛素样生长因子1 (Biovision公司)；细胞凋亡原位检测试剂盒(罗氏公司)；Trizol试剂、RT-PCR相关试剂及引物(大连宝生物公司)。引物序列如下:bcl-2上游(目标片段296 BP):CGGGCTGGGGATG

6、ACTTCTCT；下游:GCATCCCAGCCTCCGTTATCC；bax上游(目标片段452 BP):CAGGATCGAGCAGAGAGGATG；下游:GTGAGGACTCCAGCCACAAAG；-肌动蛋白上游(目标片段548 BP):ATGGATGACGTATCGCTG；下游:ATGAGGTAGTTGTCAGGT.1.2方法1.2.1动物分组将大鼠随机分为对照组、SAP组和IGF 1组，每组24只。他们术前禁食12小时，不能停止饮水。腹腔注射0.025 mL/kg的20 g/L戊巴比妥钠后，常规进行皮肤准备、消毒、铺毛巾和腹部切开。SAP组用胆管0.01 mL/kg麻醉。对照组将等量生理盐

7、水逆行注入胆胰管，逐层关闭腹部。GF1组制作与SAP组相同的模型，于术前30分钟和术后3小时皮下注射IGF 1.3 50g/kg。I组GF1于造模后6、12、24小时取8只大鼠，穿刺右心室抽血，迅速切取肺组织。测量指标。1.2.2血清淀粉酶采用全自动生化分析检测仪测定。1.2.3肺组织学检查。肺组织的石蜡切片用HE染色并在光学显微镜下观察。参考文献2。1.2.4肺组织凋亡采用TUNEL法测定，操作按试剂盒说明进行。在高倍显微镜下从同一切片上拍摄三个不同的视野。分别计算凋亡细胞数和细胞总数，取三次平均值计算凋亡指数。凋亡指数=凋亡细胞数/细胞总数100% 1 . 2 . 5肺组织中bax mRN

8、A和bcl-2 mRNA的测定Trizol试剂提取总RNA，用靶引物在20 L体系中逆转录合成cDNA。聚合酶链反应(PCR)用于扩增。bax、bcl-2和-actin的退火温度分别为58、56和54，循环次数为34次。将10L PCR扩增产物在0.1 g/L琼脂糖凝胶上电泳。UVP成像系统观察电泳条带，Labworks 4.0软件进行吸光度扫描分析。以肌动蛋白为内参照，用PCR产物吸光度与肌动蛋白吸光度的比值来表示bax mRNA和bcl-2 mRNA的表达水平。1.2.6透射电镜观察肺组织损伤超微结构变化和肺组织细胞凋亡。统计处理:所有数据均以xs表示。经SPSS10.0软件处理后，在单因素方差分析后对两组在同一时间段进行LSD t检验，并对相关数据进行Pearson相关分析。2结果2.1 SAP组血清淀粉酶在各时间点均显著高于对照组(P